PRACTICA 9: ANTIGENOS BACTERIANOS

DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE ANTICUERPOS FEBRILES

PRINCIPIO DEL MÉTODO
Los antígenos bacterianos son una técnica de aglutinación en porta y tubo para la detección y semicuantificación de anticuerpos anti-salmonella, Brucella y Proteus en suero humano. Los reactivos, suspensiones bacterianas, coloreadas y estabilizadas, aglutinan en presencia del anticuerpo homologo correspondiente en las muestra ensayadas.

SIGNIFICADO CLÍNICO
El diagnostico de enfermedades febriles pueden establecerse bien sea por el aislamiento del microorganismo en sangre, orina o heces o por la demostración del titulo del anticuerpos específicos, somáticos (O) y flagelares (H) en el suero del paciente. La determinación de estos anticuerpos forma las bases para el ensayo del Widal que establece que altos niveles de anticuerpos O y H superiores a 1/100 en suero, es indicativo de infección por estos microorganismo.

REACTIVOS 

• Salmonella paratyphi AH         a flagelar
• Salmonella paratyphi AO         1,2,12 somático 
• Salmonella paratyphi BH         b flagelar
• Salmonella paratyphi BO         1,4,5,12 somático
• Salmonella paratyphi CH         c flagelar
• Salmonella paratyphi CO         6,7 somático
• Salmonella typhi H                   d flagelar
• Salmonella typhi O                   1,9,12 somático
• Brucella abortus                       somático 
• Brucella melitensis                   somático 
• Proteus OX2                             somático
• Proteus OX19                           somático
  
• Proteus OXK                            somático

Control + 

Control -

Kit de antígenos febriles

PROCEDIMIENTO 

Usamos BRUCELLA 

No hacemos los controles, porque tomamos como muestra el control positivo.

Realizamos el método semicuantitativo.

1. Preparamos una batería de 6 tubos y los marcamos con 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320. 
   
   
   
   
   
2. Añadimos en el primer tubo 1,9 ml de ClNa y en el resto de tubos añadimos 1ml.
   
3. En el primer tubo añadimos 100ul de muestra, lo resuspendemos y pasamos al siguiente tubo 1ml, así hasta llegar al 6 tubo que desecharemos esa cantidad. Así obtenemos una dilución.
4. Añadimos 20ul de antígeno a cada tubo. Reducimos la cantidad porque al ser Brucella evitamos el efecto prozona
   
   
   
5. Lo mezclamos con el tubo en posición vertical, dando pequeños golpecitos. Los tapamos y lo dejamos 24 horas en la estufa.
6. Al día siguiente observamos los resultados

   

   SEIS TUBOS EN ORDEN 

   
    

LECTURA E INTERPRETACIÓN

Examinamos macroscópicamente el resultado y observamos aglutinación completa en todos los tubos. Obtenemos titulación 3 porque en los 3 primeros tubos la aglutinación es clara y completa, en el tubo 4 se observa una débil aglutinación parcial