PRÁCTICA 3: PCR-LÁTEX

DETERMINACION CUALITATIVA DE FACTORES REUMATOIDES (FR)

PRINCIPIO DEL MÉTODO

La PCR-Látex es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativo de PCR en suero humano. Las partículas de látex recubiertas de anticuerpos anti-PCR humana son aglutinadas por moléculas de PCR presentes en la muestra del paciente.

SIGNIFICADO CLÍNICO

La proteína C-reactiva es una proteína de  fase aguda, presente en el suero de pacientes sanos, la cual se incrementa su concentración en procesos infecciosos bacterianos y virales, tejidos dañados, inflamación y neoplasias malignas. Esta manifestación se produce después de unas horas de desarrollarse la inflamación. 

REACTIVOS 

LÁTEX: Suspensión de partículas de látex cubiertas de IgG de cabra anti PCR-humana
CONTROL + tapón rojo: Suero humano con una concentración de PCR >20mg/l
CONTROL- tapón azul. Suero animal 

MATERIAL

• Micro pipeta de 50ul
• Puntas de pipetas

PROCEDIMIENTO 

Control positivo

1. En el porta colocamos 50ul de suero del paciente control y una gota de PCR-Látex
2. Mezclamos con una punta de pipeta, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del pocillo
3. Agitar de manera circular con la mano durante 2 minutos 

Método semicuantitativo

1. Atemperar los reactivos y muestras, porque si están a temperatura baja la sensibilidad disminuye. 
2. Dispensar en cada pocillo del porta 50ul de solución salina 
   
3. Añadir 50ul de suero de paciente en el primer pocillo, homogeneizar y traspasar al siguiente pocillo 50ul. Realizar la dilución al resto de pocillos
   
4. Añadir una gota del reactivo PCR-látex en cada pocillo y mezclar, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del pocillo
   
5. Mover de manera circulas en la mano durante dos minutos.
   
   
   LECTURA E INTERPRETACIÓN
   
   Al observar el resultado vemos que la aglutinación se manifiesta hasta el pocillo 2. Como las diluciones han sido con un factor de dilución 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32 y 1/64, el titulo será 4. Para calcular la concentración del PCR-Látex aplicaremos la formula:  

                     6 x titulo de PCR --> 6 x 4 = 34mg/l

          OBSERVACIONES

Una concentración muy elevada de PCR en la muestra del paciente puede dar un resultado falsamente negativo debido al efecto prozona.